幽门螺杆菌感染 如何诊断Hp感染的诊断目前有多种方法,但各种方法均有一定局限性。实际应用中应根据不同条件和目的,作出恰当选择。临床症状及胃镜所见常无特征性,因此临床表现对诊断帮助不大。 1.细菌培养 Hp培养有一定难度,一般用牛脑心浸液琼脂、营养琼脂、空肠弯曲菌培养基础琼脂等,但需加入适量全血或血清(马、羊或人等)、药用炭、可溶性淀粉等添加成分。可直接用黏膜标本划种或将黏膜标本研磨成匀浆后接种,在湿度>90%、微需氧条件(5%O2,7%CO2,80%N2和7%H2)、37℃培养3~5天后观察结果并作鉴定。 2.尿素酶依赖性试验 此试验是鉴于Hp能产生活性很强的尿素酶,分解尿素产生氨和二氧化碳,前者依据pH的改变,后者依据放射性核素(13C或14C)标记的二氧化碳呼出量,从而反映胃内尿素酶活性,以判断有无Hp感染。 (1)快速尿素酶试验(rapid urease test,RUT):是一种简便实用、快速灵敏、准确的方法,适于胃镜检查的患者,在胃镜室内进行,并可迅速获得结果。是临床上诊断Hp感染和证实Hp根除的首选方法。由于Hp在胃内的分布特点,故活检取材部位对结果影响较大。治疗前在胃窦距幽门2~5cm范围,多点取材为好,治疗后应在胃窦和胃体同时取材检测。 (2)尿素呼吸试验(urea breath test,UBT):UBT是一种非侵入性检测Hp感染的方法,不受胃内Hp分布的影响。常用13C-UBT和14C-UBT,13C是稳定性核素,无放射性,可用于小孩和孕妇,但试剂和检测费用较高,14C为放射性核素,试剂费用低、检测方便,但可能造成放射性污染。两者均是有快速、特异、敏感和无痛苦的优点。其单项检测就可作为临床根除Hp治疗后的疗效判断标准。 3.形态学检 Hp具有典现的螺旋状或弯曲状形态。尤其在胃黏膜中,Hp和Hh的形态有特征性,故可通过形态学方法进行诊断。主要包括胃黏膜直接涂片革兰染色镜检和胃黏膜组织切片染色镜检。 (1)黏膜直接涂片:将活检胃黏膜标本的黏膜面直接涂抹于清洁载玻片上,自然干燥固定后革兰染色,油镜下观察10~20个视野,观察涂片的细菌形态和数量,可迅速确定有无Hp感染、感染的程度。由于涂片是对Hp定植部位的黏液进行观察,阳性率很高,且对治疗后残留的少量Hp也可作出诊断。本方法简便易行,适于临床应用。 (2)组织学切片:在对活检标本进行病理组织学观察时,可同用特殊染色进行细菌学检查,还可观察Hp定植的部位及与病变的关系,对于治疗后发生球形变的Hp,可同时行抗Hp抗体的免疫组化染色进行确定。可行Warthin-Starry饱和银染色、改良吉姆萨染色、甲苯胺蓝染色、苯酚复红染色等,其中以Warthin-Starry饱和银染色最好,但较繁琐,多用于科研。改良吉姆萨染色和甲苯胺蓝染色较简便,效果也较好,临床中常用。 4.血清学检查 Hp感染后诱发全身免疫反应,感染者的血清中可出现抗Hp的特异性抗体(IgG和IgA)及抗尿素酶、Vac A、Cag A等的特异性抗体,通过血清学检查可以检出。目前常用的血清学检查方法是ELISA,阳性表是既往或现症感染。近年发展的免疫印迹分析法既可用于诊断Hp感染,又可判别致病菌株。Hp的血清学诊断方法主要适用于流行病学调查。由于Hp根除治疗后血液中的抗Hp抗体并不能迅速降低,故对评价疗效果意义不大。 5.聚合酶链反应(PCR)检查 PCR能检出粪便、胃液、唾液及胃黏膜活检标本中Hp,已有多对引物用于临床检验。检测的基因主要有Hp的特异片段、尿素酶基因Ure A、毒素相关蛋白基因Cag A、致空泡毒素基因Vac A、鞭毛素基因Fla A等。由于PCR的高敏感性及临床标本易污染,而临床应用受限,主要用于科研对Hp进行分型和致病性研究。
幽门螺杆菌感染 需要做哪些常规检查1.细菌培养 直接将胃黏膜标本划种到固体培养基上或将胃黏膜标本研磨成匀浆后接种。置微氧条件下,相对湿度90%以上,37℃孵育48~72h后观察结果,至少依据涂片染色镜检、尿素酶、过氧化氢酶及氧化酶鉴定。 2.胃活检黏膜涂片 将活检黏膜面直接涂抹于清洁玻片上,自然干燥后革兰染色或复红染色,油镜观察。 3.组织切片染色 胃黏膜活检标本(宜多点取材)垂直包埋切片,采用Warthin-Starry和Centa银染色或HE染色、Giem sa染色、荧光素吖啶橙染色、米帕林染色以及无标记抗体PAP染色等在油镜下或荧光显微镜下观察。 4.尿素酶试验 Hp具高度尿素酶活性,能分解尿素产生NH+4,通过测NH+4存在与否,间接判断有否Hp感染。有pH指示剂法、分析化学法和同位素标记尿素试验等方法。 5.14C尿素呼气试验 给患者口服14C尿素,如有Hp感染,20min后患者呼出的气体中有14CO2,无Hp感染则无14CO2呼出。此试验安全、准确,重复性好,但因设备等原因不易推广应用。 6.血清学检查 应用ELISA方法检测血清或唾液中的抗Hp IgG或抗Hp IgA,为特异性和敏感性指标。 7.聚合酶链反应(PCR)技术 可检测胃液、胃黏膜、唾液中Hp,阳性率高于尿素酶法。 8.原位鉴定 可应用单克隆抗体进行免疫组织化学检测,Hp特异探针或引物进行原位杂交及PCR检测。
幽门螺杆菌感染 需要做哪些辅助检查组织切片染色:胃黏膜活检标本(宜多点取材)垂直包埋切片,采用Warthin-Starry和centa银染色或HE染色、Giemsa染色、荧光素吖啶橙染色、米帕林染色以及无标记抗体PAP染色等在油镜下或荧光显微镜下观察。
幽门螺杆菌感染 容易与哪些疾病混淆细菌学检查需与存在于胃黏膜的其他细菌鉴别,如人胃小螺杆菌和弯曲样细菌-Ⅱ。